Težave pri ohranjanju sposobnosti preživetja celic v sistemu za slikanje živih celic med slikanjem
Pustite sporočilo
Slikanje živih celic je pomembno analitično orodje v laboratorijih, ki preučujejo biomedicinske raziskovalne discipline, kot so celična biologija, nevrobiologija, farmakologija in razvojna biologija. Slikanje fiksnih celic in tkiv (pri katerih je fotobeljenje glavna težava) običajno zahteva visoko intenzivnost osvetlitve in dolg čas osvetlitve; tem pa se moramo pri slikanju živih celic izogibati. Živocelična mikroskopija običajno vključuje kompromis med pridobivanjem kakovosti slike in ohranjanjem zdravih celic. Zato so prostorske in časovne ločljivosti v poskusu pogosto omejene, da bi se izognili visoki intenzivnosti osvetlitve in dolgemu času osvetlitve. Slikanje živih celic vključuje široko paleto metod slikanja s kontrastom za optično mikroskopijo. Večina preiskav uporablja eno od mnogih vrst fluorescenčne mikroskopije, ki je pogosto kombinirana s tehnikami prepustne svetlobe, o katerih bomo razpravljali v nadaljevanju. Nenehen napredek v tehnikah slikanja in oblikovanju fluorescenčnih sond izboljšujeta moč tega pristopa, kar zagotavlja, da bo slikanje živih celic še naprej pomembno orodje v biologiji.
Pomembno opozorilo je zagotoviti, da so celice v dobrem stanju in normalno delujejo, ko so na mizici mikroskopa z osvetlitvijo v prisotnosti sintetičnih fluoroforjev ali fluorescenčnih proteinov. Pogoji, pod katerimi se celice vzdržujejo na mizici mikroskopa, čeprav so zelo različni, pogosto narekujejo uspeh ali neuspeh poskusa.
Na voljo so različna gojišča za celične kulture, ki temeljijo na posebnih biokemičnih zahtevah celic. Gojišča vsebujejo različne sestavine, vključno z aminokislinami, vitamini, anorganskimi solmi (minerali), elementi v sledovih, sestavinami nukleinske kisline (baze in nukleozidi), sladkorji, intermediati cikla trikarboksilne kisline, lipidi in koencimi. Pri gojiščih tkivnih kultur je pomemben korak nadzor koncentracije kisika, pH, puferske kapacitete, osmolarnosti, viskoznosti in površinske napetosti. Komercialno dostopne formulacije medijev pogosto vključujejo indikatorsko barvilo (npr. fenol rdeče) za vizualno določitev približne vrednosti pH. Puferski sistem ogljikovega dioksida in bikarbonata za uravnavanje pH je potreben za skoraj vse celične linije. Celice je treba gojiti v atmosferi, ki vsebuje majhno količino ogljikovega dioksida (običajno 5–7 %) v inkubatorjih za nadzor koncentracije raztopljenega plina. Za slikanje živih celic je težko zagotoviti ustrezno atmosfero z ogljikovim dioksidom, kar običajno zahteva posebej zasnovane komore za kulturo za regulirano atmosfero. Potrebe po kisiku se lahko med celičnimi linijami razlikujejo, vendar so običajne ravni atmosferskega kisika primerne za večino kultur. Kar zadeva osmolarnost, ima večina celičnih linij veliko toleranco za osmotski tlak, z dobro rastjo pri osmolarnostih med 260 in 320 miliosmolarnimi. Ko celice gojimo v kulturah na odprti plošči ali petrijevkah, lahko za obvladovanje izhlapevanja uporabimo hipotonični medij.
